
ČD Cargo, a.s. – największy czeski towarowy przewoźnik kolejowy. Spółka należy do grupy České dráhy. Przedsiębiorstwo powstało w 2007 r. wydzieleniem ze struktur spółki-matki České dráhy. Majątkiem nowo powstałej spółki zostało także 100% udziałów polskiego przewoźnika Koleje Czeskie.

České dráhy, ČD – największy przewoźnik kolejowy w Czechach, prowadzący przewozy pasażerskie i do 1 grudnia 2007 także towarowe. České dráhy są kontynuatorem ponad 160-letniej historii kolejnictwa na ziemiach Czech, Moraw i Śląska Czeskiego. W latach 90. XX wieku borykały się ze zmniejszoną ilością przewożonych pasażerów i towarów, związaną m.in. ze złym stanem infrastruktury i taboru. W ostatnich latach stan trakcji poprawił się m.in. dzięki budowie systemu „korytarzy”. Są to zmodernizowane linie kolejowe o prędkości maksymalnej 160 km/h. W ramach projektu „korytarzy” w ciągu zmodernizowanych linii budowane są także nowe obwodnice, wiadukty i tunele. W ramach modernizacji taboru zakupiono 7 pociągów Pendolino produkcji włoskiej, których maksymalną prędkość określono na 230 km/h. Kursują one na trasie Praga – Ostrawa z prędkością maksymalną 160 km/h. Od rozkładu na rok 2011/2012 zostały wycofane z obsługi tras międzynarodowych.

GW Train Regio a.s., GWTR – prywatny przewoźnik kolejowy w Czechach prowadzący przewozy pasażerskie na niektórych trasach.

Leo Express – czeski prywatny przewoźnik kolejowy. Przedsiębiorstwo zostało założone w 2010 roku, a od grudnia 2012 prowadzi regularne przewozy na trasie Praga – Bogumin.

ORLEN Unipetrol Doprava s.r.o. – trzeci co do wielkości towarowy przewoźnik kolejowy w Czechach, oferujący również leasing cystern kolejowych. Spółka obsługuje ponadto stację mycia i parowania cystern oraz realizuje w swoich warsztatach naprawy taboru kolejowego. Spółka została założona w 1995 roku pod nazwą CHEMOPETROL – DOPRAVA a.s. Pierwotna nazwa odwoływała się do warunków utworzenia spółki: chodziło o wyodrębnienie transportu kolejowego na bocznicy zakładów chemicznych Chemopetrol w Litvínovie.

PKP Cargo International – czeskie przedsiębiorstwo logistyczne i transportowe, przewoźnik kolejowy i drogowy. Trzeci pod względem wielkości kolejowy przewoźnik towarowy w Czechach. Od 2014 roku własność spółki PKP Cargo.

RegioJet a.s. – czeski prywatny przewoźnik kolejowy. Firma została założona w 2009 roku. Należy do czeskiego biura podróży Student Agency.